جدول ۴-۲: توالی آغازگرهای ژن های رفرنس مورد استفاده در qRT-PCR

توضیحات

TM

طول محصول

توالی پرایمر

نام ژن

لوکوس

آلفا-توبولین

۶۰
۶۰

۱۳۶

GGTTGCAGGGATTCTTGGTC
CTGAGGCGAAGGGTAAATGG

Alpha-Tubulin

JQ658356

بتا-اکتین

۶۰
۶۰

۱۱۵

CTCAACCCAAGGCTAACAG
GTACGCCCACTAGCATACAG

Beta-Actin

JQ658353

Melting cure analaysis4-2-1
آنالیز مرحله ذوب شدن نشان دهنده وجود تنها یک پیک با دمای ذوب مشخص می­باشد؛ که در واقع تاییدی بر تک محصوله آغازگر­های مورد استفاده می­باشد. همانطور که در شکل ژن های آنتی اکسیدانتی مشاهده می­ شود هیچ نوع پیک اضافی که حاکی از تکثیر غیر اختصاصی ژن مورد نظر و وجود پرایمر باشد دیده نمی­ شود.
شکل ۴-۳: منحنی ذوب محصولات PCR ژن Alpha-Tubulin، Beta-Actin که نشان دهنده تکثیر اختصاصی ژن مورد نظر می­باشد.

شکل ۴-۴: منحنی ذوب محصولات PCR ژن SOD،CAT،PPO که نشان دهنده تکثیر اختصاصی ژن مورد نظر می­باشد.
۴-۳ نتایج بررسی بیان ژن های آنتی اکسیدانت با بهره گرفتن از روش Real-Time PCR
ارزیابی بیان آنزیم های آنتی اکسیدانت و مسیر های متابولیسمی آن ها یکی از استراتژی های مهم برای تولید گیاهان تراریخت مقاوم به خشکی می­باشد. تنظیم پاسخ های آتنی اکسیدانی در سطح mRNA یک مسئله بسیار مهم است که نادیده گرفته می­ شود. الگوی تظاهر ژن های آنتی اکسیدانتی سوپراکسیددیسموتاز، کاتالاز و پلی فنیل اکسیداز در گیاهچه های تحت تنش خشکی در دوره­­های زمانی شاهد، ۶ساعت، ۱۲ساعت، ۲۴ساعت، ۴۸ساعت، ۷روز و ۱۴ روز مورد بررسی قرار گرفت.

(( اینجا فقط تکه ای از متن درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. ))

۴-۳-۱ الگوی تظاهر ژن سوپراکسید دیسموتاز در پاسخ به تنش خشکی
الگوی تظاهر ژن سوپراکسید دیسموتاز مطابق شکل۴-۵ مشاهده می­گردد در بافت برگ شاهد کم­ترین میزان بیان را نشان میدهد و در ۶ ساعت نسبت به شاهد افزایش یافته و در ۱۲ ساعت میزان تقریبی سه برابر کاهش بیان را مشاهده می­کنیم. بعد از گذشت یک روز بعد از اعمال تنش دوباره بیان ژن روند صعودی داشته و در دو روز به بیش­ترین میزان خود رسیده است دوباره با گذشت زمان در روز هفتم و روز چهاردهم کاهش بیان ژن سوپراکسید دیسموتاز مشاهده شد. بیش ترین میزان بیان ژن سوپر اکسید دیسموتاز در بافت ریشه در دو روز بعد از اعمال تنش مشاهد شده و میزان آن با گذشت زمان کاهش یافته است به صورتی که کم ترین میزان بیان در دوهفته بعد از اعمال تنش بوده است. افزایش فعالیت SOD در مبارزه با استرس اکسیداتیو ناشی از تنش های زیستی و غیر زیستی، نقش اساسی در بقای گیاهان تحت تنش محیطی دارد (جیل و توتجا، ۲۰۱۰). افزایش بیان مشاهده شده یک نوع سیستم محافظتی برای میتوکندری است (الشر، ۱۹۹۱). طی فرایند انتقال الکترون در اندامک میتوکندری ترکیبات ROS به میزان زیادی تولید می گردد. گیرنده نهایی الکترون در زنجیره انتقال الکترون در حالت عادی O₂ بوده که تولید کننده H₂O می باشد در طی تنش شوری سوپراکسید تولید می شود (وانلر برج،۱۹۹۲). افزایش قایل توجهی در بیان SOD در گیاهان مانند چغندر قند در شرایط تنش مشاهده شده است (بور و همکاران،۲۰۰۳). طی مطالعه ای تغییری در فعالیت SOD در ژنوتیپ های برنج مشاهده نکردند و بیان کردند که تحمل استرس با فعالیت های آنزیم کاتالاز و آسکوربات پراکسیداز همراه بوده است (سایوراما،۱۹۹۵).
شکل ۴-۵: روند تغییرات بیان ژن SOD در بافت برگ
شکل ۴-۶: روند تغییرات بیان ژن سوپراکسید دیسموتاز در بافت ریشه