رطوبت داخلی بیورآکتور از جمله پارامترهای مهم برای رشد میکروارگانیسم ها بوده و با تنظیم کردن کنترلر رطوبت بر روی مقادیر بین ۷۰ تا ۹۰% با گام افزایشی ۵% تأثیر این عامل مهم مورد مطالعه قرار گرفت.

(( اینجا فقط تکه ای از متن درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. ))

۳-۲۰-۶- تأثیر دمای داخل بیورآکتور
پارامتر دمای داخلی بیورآکتور که عامل موثر در رشد میکروارگانیسم ها می باشد مستلزم بررسی است.درجه حرارت داخل بیورآکتور در دمای ۲۰ تا ۴۰ درجه سانتی گراد با گام افزایشی ۵ درجه سانتی گراد مورد بررسی قرار گرفت.
۳-۲۰-۷- تأثیر پیش تیمار سوبسترا
همان طور که پیش تر گفته شد باگاس یک سوبسترای لیگنوسلولزی است. به منظور تبدیل قندهای پیچیده باگاس به قندهای ساده و دست یابی راحت تر میکروارگانیسم ها به این قندها برای تولید پروتئین، سوبسترا با محلول های NaOH با رقت ۱، ۲، ۳ و ۴% (w/v) با نسبت ۱۰% پیش تیمار شد.بدین منظور ۵۰ گرم سوبسترا در ۵۰۰ میلی لیتر محلول NaOH در یک ارلن قرار دادهشد و به مدت ۲ ساعت در دمای محیط قرار گرفت. پس از آن سوبسترای پیش تیمار شده چندین بار با آب مقطر شستشو گردید و در آون در دمای ۸۰ درجه سانتی گراد به مدت ۲۴ ساعت خشک شد.
۳-۲۱- تعیین اسیدهای آمینه موجود در نمونه
به منظور آنالیز اسیدهای آمینه دو روش متفاوت وجود دارد. روش اول بوسیلۀ آشکارگر UV/Vsi و با بهره گرفتن از معرفنین هدرین^[۷۵] است که این معرف با آمینو اسید های اولیه و ثانویه واکنش می دهد. روش دوم با بهره گرفتن از آشکارگر فلورسانس وOPA^[76] می باشد که حساسیت بیشتری نسبت به روش اولدارد. در این پروژه از روش OPA برای اندازه گیری آمینو اسیدهای موجود در نمونه استفاده شده است که در آن تنها آمینواسیدهای آزاد سنجیده می شوند ]۷۲[. این آزمایش با بهره گرفتن از دستگاه کروماتوگرافی مایع با کارآیی بالا^[۷۷]knauer,Germany) )، در آزمایشگاه پاتولوژی رازی بابل انجام گرفت که در آن ماده پس از شناخته شدن، به صورت پیک نمایش داده می شود. طبق این روش برای سنجش اسیدهای آمینه به یک استاندارد از همین نوع نیاز است. استاندارد مورد استفاده این آزمایش اسید آمینه هموسرین^[۷۸] بوده است. هموسرین یک آمینواسید شیمیایی است که به دلیل شباهت به آمینواسیدهای انسانی مورد استفاده قرار می گیرد. ضمن اینکه پیک مربوط به آن در پیک آنالیز اسیدهای آمینه بر روی پیک هیچ کدام از اسیدهای آمینه قرار نگرفته و ایجاد خطا نمی کند. ستون مورد استفاده در این آزمایش بر اساس گزارش آزمایشگاه C-18 بود. قبل از انجام آزمایش می بایست نمونه برای تزریق به دستگاه آماده شود. مراحل آماده سازی به صورت زیر است:
- دپروتئینه کردن: ۲۰۰ میکرو لیتر از نمونه را با ۵۰ میکرولیتر اسید آمینه هموسرین و ۸۰۰ میکرولیتر متانول (با خلوص بالا) را مخلوط کرده و پس از ۵ دقیقه در سانتریفیوژ با ۴۰۰۰ دور در دقیقه قرار داده شد و مایع بالایی برای ادامه کار مورد استفاده قرار گرفت.
- مشتق سازی: ۲۵۰ میکرولیتر از نمونه جدا شده مرحله قبل را با ۱۰۰ میکرولیتر سدیم تترا بورات و ۵۰ میکرولیتر OPA مخلوط کرده پس از گذشت ۲ دقیقه ۲۵ میکرولیتر هیدروکلریک اسید (۰/۷۵ نرمال) به آن افزوده که سبب توقف واکنش می شود.
- تزریق:۵۰ میکرولیتر از محلول با ۲۰۰ میکرولیتر فاز متحرک مخلوط شده و میزان ۲۰ میکرولیتر از آن به دستگاه تزریق شد.
فصل چهارم
نتایج و بحث
۴-۱- مقدمه
در این فصل به ارائه نتایج آزمایش ها و بررسی و تحلیل یافته های آزمایشگاهی پرداخته می شود. نتایج مربوط به آزمایش های ناپیوسته در غالب تأثیر بافر استخراج، رطوبت اولیه سوبسترا، مدت زمان تخمیر، دما و رطوبت داخلی بیورآکتور، غنی سازی سوبسترا با منابع نیتروژنی، پیش تیمار سوبسترا و تعیین اسیدهای آمینه ارائه می گردد.
۴-۲- محاسبه خصوصیات سوبسترا
مشخصات باگاس استفاده شده برای تولید پروتئین تک یاخته در تخمیر حالت جامد با توجه به آنالیزهای مختلف ارائه شده در فصل سوم مورد بررسی قرار گرفت و نتایج مربوط به خصوصیات فیزیکی و شیمیایی باگاس در جدول ۴-۱ ارائه شده است.
جدول ۴-۱: خصوصیات فیزیکی و شیمیایی باگاس